يؤدي اختلال تنظيم الكينازات المعتمدة على السيكلين (CDKs) إلى دفع تقدّم دورة الخلية بشكل غير مضبوط في العديد من الأورام الخبيثة، مما يجعل كلًا من CDK4 وCDK6 أهدافًا علاجية واعدة. تستعرض هذه الدراسة التصميم العقلاني والتخليق والتقييم الشامل لخمسة عشر مشتقًا جديدًا من بيرازولو[1,5-a]بيريميدين (19a–o) كمثبطات للكينازات المعتمدة على السيكلين. وقد حدّدت دراسات علاقة البنية بالنشاط المركّب 19i كمرشح رئيسي، حيث أظهر فعالية محسّنة مضادة للتكاثر ضد خلايا سرطان القولون والمستقيم HCT-116 بقيمة IC50 بلغت 1.02 ميكرومولار، وهي أعلى قليلًا من نظيرتها لعقار دوكسوروبيسين (IC50 = 1.08 ميكرومولار). أظهرت الدراسات الآلية أن المركب 19i يُحدث تثبيطًا ملحوظًا لدورة الخلية في طور G0/G1، إضافةً إلى إحداث موت خلوي مبرمج (apoptosis) بدرجة كبيرة، حيث بلغ إجمالي الاستماتة 47.76% من الخلايا المعالجة. كما أكدت تحاليل ELISA تنشيط مسار الاستماتة الداخلي المعتمد على p53، ويتضح ذلك من خلال زيادة مقدارها 6.90 أضعاف في p53، وزيادة بمقدار 3.03 أضعاف في Bax، وانخفاض إلى 0.39 ضعف في Bcl-2، وارتفاع بمقدار 9.56 أضعاف في نشاط الكاسباز-3. كشفت الاختبارات البيوكيميائية للكينازات عن تثبيط ملحوظ لكل من CDK4 (IC50 = 0.087 ميكرومولار) وCDK6 (IC50 = 0.114 ميكرومولار). كما أظهرت دراسات الإرساء الجزيئي (molecular docking) وجود تفاعلات ارتباط أساسية، بما في ذلك روابط هيدروجينية مع Lys35 وVal101، وتراص عطري من نوع π–π، إضافةً إلى رابطة هالوجينية جديدة مع Glu94. وأكدت محاكاة الديناميكيات الجزيئية استقرارًا بنيويًا ممتدًا للبروتين وكفاءة عالية في الارتباط بالهدف. تشير هذه النتائج مجتمعةً إلى أن هيكل بيرازولو[1,5-a]بيريميدين يُعد إطارًا واعدًا لتطوير علاجات مضادة للسرطان تستهدف الكينازات المعتمدة على السيكلين.