يؤدي اختلال تنظيم الكينازات المعتمدة على السيكلين (CDKs) إلى دفع تقدم دورة الخلية بشكل غير مضبوط في عدة أورام خبيثة، مما يجعل كلًّا من CDK4 وCDK6 أهدافًا علاجية واعدة. تستعرض هذه الدراسة التصميم العقلاني، والتخليق، والتقييم الشامل لخمسة عشر مشتقًا جديدًا من البيرازولو[1,5-a]بيريميدين (19a–o) كمثبطات للكينازات المعتمدة على السيكلين. وقد حدّدت دراسات العلاقة بين البنية والنشاط المركّب 19i بوصفه المرشح الرئيسي، حيث أظهر فعالية محسّنة مضادة للتكاثر ضد خلايا سرطان القولون HCT-116 بقيمة IC50 بلغت 1.02 ميكرومولار، وهي قيمة أعلى قليلًا من تلك الخاصة بدوكسوروبيسين (IC50 = 1.08 ميكرومولار). وأظهرت الدراسات الآلية أن المركّب 19i يُحدث توقّفًا ملحوظًا في دورة الخلية عند طور G0/G1، بالإضافة إلى إحداث موت خلوي مبرمج (apoptosis) بدرجة كبيرة، حيث بلغت نسبة الاستماتة الكلية 47.76% من الخلايا المعالجة. كما أكّد تحليل ELISA تنشيط مسار الاستماتة الداخلي المعتمد على p53، وهو ما تجلّى في زيادة بمقدار 6.90 مرات في p53، وزيادة بمقدار 3.03 مرات في Bax، وانخفاض إلى 0.39 مرة في Bcl-2، فضلًا عن زيادة نشاط الكاسبيز-3 بمقدار 9.56 مرات. وكشفت اختبارات الكيناز البيوكيميائية عن تثبيط ملحوظ لكلٍّ من CDK4 (IC50 = 0.087 ميكرومولار) وCDK6 (IC50 = 0.114 ميكرومولار). كما أظهرت دراسات الإرساء الجزيئي (molecular docking) تفاعلات ارتباط أساسية، تشمل روابط هيدروجينية مع Lys35 وVal101، وتراص عطري من نوع π–π، بالإضافة إلى رابطة هالوجينية جديدة مع Glu94. وأكّدت محاكاة الديناميكيات الجزيئية استقرارًا طويل الأمد للبنية الفراغية للبروتين وكفاءة عالية في الارتباط بالهدف. وبصورة إجمالية، تشير هذه النتائج إلى أن هيكل البيرازولو[1,5-a]بيريميدين يُعد إطارًا واعدًا لتطوير علاجات مضادة للسرطان تستهدف الكينازات المعتمدة على السيكلين.